高效液相色譜實現對試樣的分析的同時也要注意維護

更新時間：2020-05-25 閱讀：2880

高效液相色譜（HPLC）是色譜法的一種，以液體為流動相，采用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。該方法已成為化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術。高效液相色譜的維護建議考慮以下方面：

一、流動相及樣品的制備要求

1.高效液相級色譜醇，二次蒸餾水，緩沖鹽一定要過濾，且流動相需要定期更換。

2. 流動相脫氣至關重要（可采用抽濾，超聲波脫氣等方法）；

3. 樣品溶解后，用0.22微米的有機系膜或者水系膜過濾。

二、高壓恒流泵的維護和保養

1. 高壓恒流泵為整個色譜系統提供穩定均衡的流動相流速，保證系統的穩定運行和系統的重現性。高壓輸液泵由步進電機和柱塞等組成，高壓力長時間的運行回逐漸磨損泵的內部結構。在升高流速的時候應梯度升高，建議每次升高0.2mL/min，當壓力穩定時再升高，如此反復直到升高到所需流速。

2. 特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流動相通過吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。若有堵塞情況可用異丙醇或甲醇超聲波清洗；清洗不成功則需要更換。

3．在儀器使用完了以后，要及時清洗管路并沖洗泵，保證泵的良好運轉環境，保證泵的正常使用壽命。

三、色譜柱的維護和保養

1．所使用的流動相均應為HPLC級或相當于該級別的，在配置過程中所有非HPLC級的試劑或溶液均經0.22um薄膜過濾，而且流動相使用前都經過超聲儀超聲脫氣后才使用。

2．所使用的水必須是經過蒸餾純化后再經過0.22um水膜過濾后使用，所有試液均現用現配。并且在進樣的樣品都必須經過0.22um薄膜針筒過濾后進樣。

3．所使用到的大流速為1.0mL/min，所以流速提升過程應是梯度提升，不存在流速的突升突降。