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在使用高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行日常分析檢測(cè)的過(guò)程中，有時(shí)會(huì)遇到色譜峰峰面積重現(xiàn)性差的問題，導(dǎo)致無(wú)法對(duì)組分進(jìn)行準(zhǔn)確定量。出峰面積重現(xiàn)性差的話，首先要看保留時(shí)間是否穩(wěn)定。如果保留時(shí)間都不穩(wěn)定，那也不用說(shuō)出峰面積的穩(wěn)定了。而保留時(shí)間的穩(wěn)定性，跟系統(tǒng)的壓力、流動(dòng)相比例、流動(dòng)相的脫氣以及色譜柱都有關(guān)系。導(dǎo)致色譜峰峰面積重現(xiàn)性差的常見原因及解決方法：1、檢查進(jìn)樣量及進(jìn)樣操作進(jìn)樣量不符合要求或者進(jìn)樣時(shí)操作失誤，都可能導(dǎo)致色譜峰面積重現(xiàn)性差。如果是使用手動(dòng)進(jìn)樣器且方法要求進(jìn)樣量小于定量環(huán)體積，必...

液相色譜柱的損壞70-80%都是由于柱壓升高導(dǎo)致的，色譜柱使用了一段時(shí)間以后，壓力會(huì)有所升高，達(dá)到一定程度以后色譜柱就會(huì)報(bào)廢，如果在一天之內(nèi)壓力升高了2-5個(gè)mpa，或者在幾次使用后壓力就翻倍的升高，這些都是異常狀況，那建議進(jìn)行排除。一、色譜柱保存不當(dāng)原因：色譜柱如較長(zhǎng)時(shí)間不用，重新啟用后需按說(shuō)明書的活化方法重新活化后再使用，否則也會(huì)出現(xiàn)柱壓升高，柱效下降。解決辦法：按說(shuō)明書重新活化色譜柱。原因：除另有規(guī)定外，一般反相色譜柱都需保存在高比例有機(jī)相中，以防止微生物滋生。否則，重...

標(biāo)準(zhǔn)曲線法，分為外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法。外標(biāo)法在液相色譜中用的較多。內(nèi)標(biāo)法準(zhǔn)確但是麻煩，在標(biāo)準(zhǔn)方法中用的較多。1、外標(biāo)法用被測(cè)化合物的純品作為標(biāo)準(zhǔn)樣品，配制成一系列的已知濃度的標(biāo)樣。注入色譜柱的到其響應(yīng)值（峰面積）。在一定范圍內(nèi)，標(biāo)樣的濃度與響應(yīng)值之間存在較好的線性關(guān)系，即W=f×A，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。在*相同的實(shí)驗(yàn)條件下，注入未知樣品，得到欲測(cè)組分的響應(yīng)值。根據(jù)已知的系數(shù)f，即可求出欲測(cè)組分的濃度。外標(biāo)法的優(yōu)點(diǎn)：操作、計(jì)算簡(jiǎn)單，是一種常用的定量方法；無(wú)需各組分都被檢出、洗脫；需要標(biāo)樣；...

紫外檢測(cè)器的使用覆蓋面達(dá)到HPLC檢測(cè)器的75%，在各個(gè)領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用，特別是在藥品、環(huán)保、生命科學(xué)、糧食科學(xué)、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品科學(xué)、醫(yī)療衛(wèi)生等領(lǐng)域，應(yīng)用更加廣泛。國(guó)際上生產(chǎn)HPLC的廠商很多，無(wú)一不帶紫外檢測(cè)器。中國(guó)也有10幾家生產(chǎn)HPLC的企業(yè)。基本上都帶紫外檢測(cè)器。有的HPLC只有紫外檢測(cè)器一種，而無(wú)其它類型的檢測(cè)器。紫外檢測(cè)器不僅靈敏度高、噪音低、線性范圍寬、有較好的選擇性，而且對(duì)環(huán)境溫度、流動(dòng)相組成變化和流速波動(dòng)不太敏感，因此既可用于等度洗脫，也可用于梯度洗脫。...

C18色譜柱因鍵合方式的不同、粒徑的不同、長(zhǎng)度的不同，內(nèi)徑的差異等多方面因素，呈現(xiàn)出不同選擇性。這樣，在市場(chǎng)上就出現(xiàn)了數(shù)百種具有不同分離選擇特性的C18色譜柱。對(duì)于傳統(tǒng)的C18色譜柱，pH值使用范圍通常為2～7，因?yàn)閜H值高于8時(shí)C18固定相會(huì)受到限制。由于殘余硅羥基的存在，易對(duì)堿性化合物造成不可逆吸附，造成峰拖尾，影響分離與分析。pH值太低則會(huì)使鍵合的烷基脫落，而且對(duì)成分的分離達(dá)不到要求。1、酸性條件下C18的選擇為了改善C18色譜柱在低pH值時(shí)的穩(wěn)定性，有人提出了空間位阻...

紫外檢測(cè)器（ultraviolet－visibledetector，UVD）是HPLC中應(yīng)用廣泛的檢測(cè)器之一，幾乎所有的液相色譜儀都配有這種檢測(cè)器。其特點(diǎn)是靈敏度較高，線性范圍寬，噪聲低，適用于梯度洗脫，對(duì)強(qiáng)吸收物質(zhì)檢測(cè)限可達(dá)1ng，檢測(cè)后不破壞樣品，可用于制備，并能與任何檢測(cè)器串聯(lián)使用。紫外檢測(cè)器主要由光源、分光系統(tǒng)、檢測(cè)池和檢測(cè)系統(tǒng)四大部分組成，從光源分光系統(tǒng)得到的特定波長(zhǎng)的單色光通過(guò)檢測(cè)池時(shí)，一部分光被溶液中的吸光性溶質(zhì)吸收，剩余的透射光到達(dá)檢測(cè)系統(tǒng)后光信號(hào)轉(zhuǎn)換成電信號(hào)...

色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。只有了解影響色譜柱性能的因素，才能結(jié)合目標(biāo)分析物的性質(zhì)、需要達(dá)到的分析效果及實(shí)驗(yàn)室條件來(lái)選擇適合的色譜柱。(1)硅膠純度硅膠純度和殘留金屬離子濃度，硅膠的雜質(zhì)會(huì)影響化合物的峰形，硅膠表面的金屬含量高會(huì)影響堿性化合物的峰形，易發(fā)生拖尾。(2)色譜柱尺寸填料床的長(zhǎng)度和內(nèi)徑，增加色譜柱長(zhǎng)度，可以在一定程度上提高柱效，但也會(huì)升高壓力和導(dǎo)致峰展寬；寬柱徑，提高載樣量，但也會(huì)增加橫向擴(kuò)散，同樣會(huì)導(dǎo)致峰展寬。窄柱徑可以節(jié)約...

液相色譜檢測(cè)器是HPLC儀的三大關(guān)鍵部件之一。檢測(cè)器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測(cè)的信號(hào)。HPLC的檢測(cè)器要求靈敏度高、噪音低（即對(duì)溫度、流量等外界變化不敏感）、線性范圍寬、重復(fù)性好和適用范圍廣。1、按原理可分為光學(xué)檢測(cè)器（如紫外、熒光、示差折光、蒸發(fā)光散射）、熱學(xué)檢測(cè)器（如吸附熱）、電化學(xué)檢測(cè)器（如極譜、庫(kù)侖、安培）、電學(xué)檢測(cè)器（電導(dǎo)、介電常數(shù)、壓電石英頻率）、放射性檢測(cè)器（閃爍計(jì)數(shù)、電子捕獲、氦離子化）以及氫火焰離子化檢測(cè)器。2、按測(cè)量性質(zhì)可分為通...